Técnicas convencionales aplicadas al diagnóstico de las hemoglobinopatías / Conventional techniques applied to the diagnosis of hemoglobinopathies / Técnicas convencionais aplicadas ao diagnóstico das hemoglobinopatias

Las hemoglobinopatías son trastornos hereditarios debidos a una gran variedad de defectos que afectan a los genes de globina. El diagnóstico de las hemoglobinopatías resulta de una combinación de estudios clínicos, pruebas de laboratorio y estudio familiar. Las herramientas básicas incluyen hemograma, hemoglobina e índices eritrocitarios (VCM, HCM), morfología de los eritrocitos, recuento de reticulocitos y perfil de hierro. Las determinaciones complementarias son electroforesis de hemoglobina que permite separar las diferentes variantes de acuerdo con su carga eléctrica, cuantificación de hemoglobina A2 (HbA2), Fetal (Hb F), pruebas de solubilidad hemoglobínica y falciformación. Otras técnicas se basan en propiedades fisicoquímicas como la estabilidad de la hemoglobina para detección de variantes inestables. En la práctica las pruebas más útiles son las que permiten detectar la presencia de hemoglobinopatías, como ocurre con la hemoglobina S dejando para laboratorios especializados aquellos procedimientos para identificar la mutación. La correcta detección de los portadores de las diferentes hemoglobinopatías tiene como finalidad dar un consejo genético adecuado sobre la forma de herencia, el riesgo de tener hijos afectados con las formas graves de la enfermedad y evitar tratamientos innecesarios. El diagnóstico molecular se reserva para la alfa talasemia, para cuadros con genotipos complejos, estudios prenatales o epidemiológicos.

Hemoglobinopathies are hereditary syndromes determined by a large variety of globin gene defects. Hemoglobinopathy diagnosis results from the combination of clinical orientation, laboratory tests and family studies. Basic tools include complete blood cell count, red blood cell count, hemoglobin quantification and red cell indices (MCV, MCH), blood film examination, reticulocyte count and iron status. Complementary determinations are hemoglobin electrophoresis, which enables the separation of the different hemoglobin variants according to their electrical charge, A2, and Fetal hemoglobin quantification, hemoglobin solubility and sickling test for Hb S diagnosis. Other techniques are based on physicochemical properties such as stability of hemoglobin for detection of unstable variants. In practice, the most useful tests are those that enable the detection of hemoglobinopathies, such as hemoglobin S, and the identification of the genetic defects is referred to specialized laboratories. The correct detection of the carriers of the different hemoglobinopathies is intended to give adequate genetic advice on the form of inheritance and the risk of having affected children with the severe forms of the disease and to avoid unnecessary treatments. Molecular diagnosis is reserved to a thalassemia complex genotypes, prenatal o epidemiological studies.

As hemoglobinopatias são distúrbios hereditários resultantes de uma grande variedade de defeitos que afetam os genes de globina. O diagnóstico das hemoglobinopatias decorre de uma combinação de estudos clínicos, provas de laboratório e estudo familiar. As ferramentas básicas incluem hemograma, hemoglobina e índices eritrocitários (VCM, HCM), morfologia dos eritrócitos, contagem de reticulócitos e perfil de ferro. As determinações complementares são eletroforese de hemoglobina que permite separar as diferentes variantes, de acordo com sua carga elétrica, quantificação de hemoglobina A2 (HbA2), Fetal (Hb F), provas de solubilidade hemoglobínica e falciformação. Outras técnicas baseiam-se em propriedades fisicoquímicas como a estabilidade da hemoglobina para detecção de variantes instáveis. Na prática, as provas mais úteis são as que permitem detectar a presença de hemoglobinopatias, como acontece com a hemoglobina S deixando para laboratórios especializados aqueles procedimentos para identificar a mutação. Detectar corretamente os portadores das diferentes hemoglobinopatías visa a dar um conselho genético adequado sobre a forma de herança, o risco de ter filhos afetados com as formas graves da doença e evitar tratamentos desnecessários. O diagnóstico molecular se reserva para a alfa talassemia, para quadros com genótipos complexos, estudos pré-natais ou epidemiológicos.

Hb Wilde and Hb Patagonia: two novel elongated beta-globin variants causing dominant beta-thalassemia.

We describe here the molecular and hematological characteristics of novel frameshift mutations in exon 2 of the HBB gene (in heterozygous state) found in two Argentinean pediatric patients with dominant ß-thalassemia-like features. In Hb Wilde, HBB:c.270_273delTGAG(p.Glu90Cysfs*67), we detected the deletion of the third base of the codon 89 (T) and the codon 90 (GAG), whereas in Hb Patagonia, HBB:c.296_297dupGT(p.Asp99Trpfs*59), the frameshift mutation was due to a duplication of a 'GT' dinucleotide after the second base of codon 98 (GTG). The Hb Patagonia and Hb Wilde mutations would result in elongated ß-globin chains with modified C-terminal sequences and a total of 155 and 157 amino acids residues, respectively. Based on bioinformatics and structural analysis, as well as protein modeling, we predict that the elongated ß-globins would affect the formation of the αß dimers and their stability, which would further support the mechanism for the observed clinical features in both patients.

Síndromes talasémicos: bases moleculares / Thalassemic syndromes: molecular bases

Las hemoglobinopatías se deben a una gran variedad de defectos de los genes de globina. Mientras que las hemoglobinopatías estructurales y los síndromes de sobreexpresión son determinados por unos pocos mecanismos fisiopatológicos (mutaciones sin sentido, y mutaciones en la región promotora o deleciones I inserciones respectivamente), los sindromes talasémicos (y las hemoglobinopatías talasémicas) tienen causas gen éticas muy diversas, con consecuencias fisiopatológicas a veces complejas. El propósito de esta revisión es proveer una introducción para la mejor comprensión de las bases moleculares de esta patología hereditaria frecuente aunque subdiagnosticada. Médicos y biólogos deben ser concientes de la importancia de este conocimiento para el diagnóstico molecular correcto en casos de estudios prenatales o preimplante realizados con el fin de evitar el nacimiento de niños con talasemia mayor

Síndromes talasémicos: bases moleculares / Thalassemic syndromes: molecular bases

Las hemoglobinopatías se deben a una gran variedad de defectos de los genes de globina. Mientras que las hemoglobinopatías estructurales y los síndromes de sobreexpresión son determinados por unos pocos mecanismos fisiopatológicos (mutaciones sin sentido, y mutaciones en la región promotora o deleciones I inserciones respectivamente), los sindromes talasémicos (y las hemoglobinopatías talasémicas) tienen causas gen éticas muy diversas, con consecuencias fisiopatológicas a veces complejas. El propósito de esta revisión es proveer una introducción para la mejor comprensión de las bases moleculares de esta patología hereditaria frecuente aunque subdiagnosticada. Médicos y biólogos deben ser concientes de la importancia de este conocimiento para el diagnóstico molecular correcto en casos de estudios prenatales o preimplante realizados con el fin de evitar el nacimiento de niños con talasemia mayor(AU)

Detección e identificación de hemoglobinopatías / Haemoglobunipathies. Detection and identification

When a patient must be studied for a suspected hemoglobin abnormality, several approaches should be followed. The most important mean for establishing the relationship between a given abnormality and the clinical effect, assessing if the pathology is congenital, inherited, a "novo mulation" or even acquired, is a complete family study with a normal control, avoiding the workout of a transfused patient. Through the clinical history the following information should be investigated: patient and ancestors geographical background, evidence of hyperthemolysis or increased hemolysis by oxidant drugs exposure or infection, antecedents of paintful abdominal or bone crisis, splenomegaly, gallstones, cyanosis, erythrocytosis, etc.Its recomended to conduct the following laboratory studies: 1)hematological evaluation with automated cellcounter, careful observation of the red cell morphology and reticulocyte count, 2)electrophoretic analysis, 3)cuantification of Hb A2, 4)detection of Hb S and 5)detection of unstable hemoglobin variants

Detección e identificación de hemoglobinopatías / Haemoglobunipathies. Detection and identification

When a patient must be studied for a suspected hemoglobin abnormality, several approaches should be followed. The most important mean for establishing the relationship between a given abnormality and the clinical effect, assessing if the pathology is congenital, inherited, a "novo mulation" or even acquired, is a complete family study with a normal control, avoiding the workout of a transfused patient. Through the clinical history the following information should be investigated: patient and ancestors geographical background, evidence of hyperthemolysis or increased hemolysis by oxidant drugs exposure or infection, antecedents of paintful abdominal or bone crisis, splenomegaly, gallstones, cyanosis, erythrocytosis, etc.Its recomended to conduct the following laboratory studies: 1)hematological evaluation with automated cellcounter, careful observation of the red cell morphology and reticulocyte count, 2)electrophoretic analysis, 3)cuantification of Hb A2, 4)detection of Hb S and 5)detection of unstable hemoglobin variants (AU)